Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) Dyskerin: sc-401278-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Dyskerin consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Dyskerin (h) y el plásmido de doble nickasa Dyskerin (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a DKC1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Dyskerin Anticuerpo (H-3): sc-373956
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Dyskerin | sc-401278-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Dyskerin | sc-401278-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DKC1 codifica la disquerina, una proteína nucleolar esencial que cataliza la pseudouridilación de ARNr y ARNs (snRNA) como parte de complejos ribonucleoproteicos nucleolares pequeños H/ACA, lo que respalda la biogénesis de ribosomas y la fidelidad del empalme (splicing) del pre-ARNm. La disquerina también se asocia con el complejo ribonucleoproteico de la telomerasa para estabilizar el ARN de la telomerasa e influir en el mantenimiento de los telómeros, vinculando la modificación de ARN con la estabilidad del genoma. A través de estas funciones, DKC1 afecta el control de la traducción, la señalización de estrés nucleolar y los programas de proliferación celular. La alteración genética o disfunción de DKC1 se ha implicado en trastornos de la biología de los telómeros y ribosomopatías, proporcionando un puente mecanístico entre el procesamiento deficiente de ARN y la homeostasis celular alterada.
Dyskerin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DKC1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DKC1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DKC1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DKC1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.