Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400571-ACT

DVL2 codifica Dishevelled 2 (Dvl-2), una proteina di impalcatura citoplasmatica che collega i recettori Frizzled alla segnalazione Wnt a valle. Dvl-2 coordina sia i programmi trascrizionali canonici dipendenti da β-catenina sia le vie non canoniche della polarità planare cellulare e Wnt/Ca²⁺, integrando i segnali attraverso i domini DIX, PDZ e DEP. Attraverso queste reti, DVL2 influenza il patterning embrionale, la polarità cellulare, la migrazione e il rimodellamento del citoscheletro. Un’attività aberrante di DVL2 e la disregolazione della via Wnt sono frequentemente studiate in modelli di segnalazione oncogenica, disturbi dello sviluppo e omeostasi tissutale.

Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DVL2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DVL2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DVL2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DVL2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 nelle cellule tumorali con espressione di DVL2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.