Dok-3 Plasmide Double Nickase (m): sc-424217-NIC

Il gene murino **Dok3** codifica **Dok-3**, una proteina adattatrice della famiglia **DOK (downstream of kinase)** che modula la segnalazione prossimale ai recettori nelle cellule ematopoietiche e immunitarie. Dok-3 partecipa alle vie del recettore delle cellule B e dei recettori Fc assemblando complessi di segnalazione che influenzano le chinasi della famiglia Src, le cascate dipendenti da Syk e gli output MAPK/ERK, contribuendo così a definire le soglie di attivazione e le risposte citochiniche. Grazie alla sua funzione di scaffold, Dok-3 contribuisce alla regolazione della segnalazione immunitaria innata e adattativa, incluse le risposte legate ai recettori Toll-like nelle linee mieloidi. Una segnalazione associata a DOK3 deregolata è stata implicata in disfunzioni immunitarie e fenotipi infiammatori, sostenendone l’impiego come bersaglio per studi meccanicistici in immunologia e biologia delle cellule ematopoietiche.

Dok-3 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Dok3 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Dok3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Dok3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Dok3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.