Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
DOCK 8 Plasmide Double Nickase (h): sc-401727-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DOCK 8 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DOCK 8 Double Nickase Plasmid (h) e il DOCK 8 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DOCK8. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DOCK 8 Antibody (G-2): sc-376911
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DOCK 8 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401727-NIC | 20 µg | $410.00 |
DOCK8 codifica la “dedicator of cytokinesis 8”, un fattore di scambio dei nucleotidi della guanina (GEF) atipico che regola le GTPasi della famiglia Rho per coordinare il rimodellamento del citoscheletro di actina, la polarità cellulare e l’integrazione dei segnali a valle dei recettori immunitari. DOCK8 sostiene la migrazione dei linfociti, la formazione della sinapsi immunologica e la sopravvivenza cellulare, collegando la dinamica del citoscheletro con vie che controllano l’adesione e il traffico vescicolare. Varianti a perdita di funzione alterano il controllo del citoscheletro nelle cellule ematopoietiche e sono associate a fenotipi di immunodeficienza primaria caratterizzati da risposte antivirali compromesse e da una omeostasi immunitaria deregolata. In quanto nodo di segnalazione che connette gli input recettoriali a processi dipendenti dall’actina, DOCK8 è ampiamente studiato nella biologia dei leucociti, nelle interazioni ospite–patogeno e nello sviluppo delle cellule immunitarie.
DOCK 8 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DOCK8 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DOCK8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DOCK8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DOCK8 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.