Plasmide CRISPR d'Activation (m) Dnmt3b: sc-420036-ACT

La Dnmt3b murine code une ADN méthyltransférase de novo qui dépose la 5‑méthylcytosine sur les dinucléotides CpG afin d’établir et de maintenir le silençage épigénétique au cours du développement embryonnaire et de l’engagement des lignages. DNMT3B coopère avec DNMT3A et avec la méthylation d’entretien médiée par UHRF1/DNMT1 pour façonner l’état de la chromatine, les programmes transcriptionnels et la stabilité du génome, notamment via la répression des éléments transposables et la régulation de l’empreinte génomique. Cette enzyme s’intègre aux voies de remodelage de la chromatine et de modifications des histones, influençant la dynamique de méthylation des promoteurs et des enhancers au fil de la différenciation et de la reprogrammation. Une activité altérée de DNMT3B est associée à des profils de méthylation aberrants observés dans des troubles du développement et dans la dérégulation épigénétique liée aux cancers, ce qui en fait un nœud central pour l’étude de la régulation génique dépendante de l’épigénome.

Dnmt3b Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Dnmt3b sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Dnmt3b Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Dnmt3b dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Dnmt3b, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Dnmt3b. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Dnmt3b natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Dnmt3b au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Dnmt3b dans les cellules tumorales présentant une expression de Dnmt3b silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.