DnaJB4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403159-ACT

Il gene umano **DNAJB4** codifica **DnaJB4**, un co-chaperone a dominio J della famiglia **HSP40** che regola l’attività ATPasica di **HSP70** per favorire il corretto ripiegamento, il ripiegamento assistito e lo smistamento delle proteine client verso la degradazione. Partecipando alle reti di proteostasi, DnaJB4 contribuisce al controllo di qualità citosolico e alle risposte adattative allo stress, influenzando la gestione di proteine mal ripiegate o inclini all’aggregazione. Queste funzioni si intersecano con le vie che controllano l’omeostasi proteica, incluse l’autofagia assistita da chaperoni e i meccanismi di eliminazione collegati al proteasoma. La disregolazione dei sistemi chaperonici è rilevante per patologie caratterizzate da proteostasi compromessa, tra cui neurodegenerazione e miopatie, rendendo **DNAJB4** un nodo utile per studi meccanicistici sullo stress cellulare e sul controllo della qualità proteica.

DnaJB4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DNAJB4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

DnaJB4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DNAJB4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DNAJB4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DnaJB4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DNAJB4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DnaJB4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DnaJB4 nelle cellule tumorali con espressione di DNAJB4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.