Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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DNA Ligase IV Plasmide Double Nickase (h): sc-401372-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DNA Ligase IV Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DNA Ligase IV Double Nickase Plasmid (h) e il DNA Ligase IV Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira LIG4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DNA Ligase IV Antibody (D-8): sc-271299
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DNA Ligase IV Plasmide Double Nickase (h) | sc-401372-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DNA Ligase IV Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401372-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LIG4 codifica la DNA ligasi IV, una ligasi ATP-dipendente che salda le estremità delle rotture a doppio filamento del DNA durante il classico non-homologous end joining (c-NHEJ). Agendo insieme a XRCC4, XLF/NHEJ1 e al complesso DNA-PK, la DNA ligasi IV è essenziale per la stabilità del genoma, la ricombinazione V(D)J e la riparazione di lesioni indotte da radiazioni ionizzanti. L’alterazione di LIG4 compromette la fedeltà della riparazione delle rotture a doppio filamento, aumentando le aberrazioni cromosomiche e la sensibilità allo stress genotossico. Le varianti patogene sono associate alla sindrome da LIG4 e a fenotipi più ampi di immunodeficienza e radiosensibilità, rendendo questa via centrale negli studi sulla risposta al danno del DNA e sullo sviluppo dei linfociti.
DNA Ligase IV Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LIG4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LIG4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LIG4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LIG4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.