DLD Plasmide Double Nickase (h): sc-403207-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DLD Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DLD Double Nickase Plasmid (h) e il DLD Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DLD. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DLD Antibody (G-2): sc-365977
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DLD Plasmide Double Nickase (h) | sc-403207-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DLD Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403207-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DLD codifica la diidrolipoamide deidrogenasi (E3), un’ossidoreduttasi flavino-dipendente che riossida la diidrolipoamide a lipoamide riducendo al contempo NAD+ a NADH. In quanto subunità E3 condivisa, DLD sostiene il metabolismo energetico mitocondriale attraverso i complessi della piruvato deidrogenasi, della α-chetoglutarato deidrogenasi e della deidrogenasi degli α-chetoacidi a catena ramificata, collegando la glicolisi e il catabolismo degli amminoacidi al ciclo TCA e alla fosforilazione ossidativa. L’alterazione di DLD compromette l’omeostasi redox e la funzione mitocondriale, modificando l’equilibrio NADH/NAD+ e la gestione delle specie reattive dell’ossigeno. Le varianti genetiche in DLD sono associate a errori congeniti del metabolismo caratterizzati da ridotta capacità ossidativa e acidosi lattica, e la disregolazione dell’energetica mitocondriale è rilevante per la ricerca sulla neurodegenerazione e sulla bioenergetica del cancro.
DLD Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DLD nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DLD. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DLD. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DLD interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.