DIO3 Plasmide Double Nickase (m): sc-430733-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DIO3 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DIO3 Double Nickase Plasmid (m) e il DIO3 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Dio3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DIO3 Plasmide Double Nickase (m) | sc-430733-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene Dio3 del topo codifica la deiodinasi di tipo 3 delle iodotironine (DIO3), un selenoenzima associato al reticolo endoplasmatico e alla membrana plasmatica che inattiva gli ormoni tiroidei convertendo la T4 in T3 inversa (rT3) e la T3 in T2, limitando così la segnalazione locale degli ormoni tiroidei. Modulando la disponibilità intracellulare di T3, DIO3 influenza programmi trascrizionali dipendenti dal recettore degli ormoni tiroidei che regolano proliferazione, differenziamento, metabolismo e tempistica dello sviluppo. Dio3 è un gene imprintato all’interno del locus Dlk1–Dio3 ed è coinvolto in modo rilevante nel patterning dei tessuti fetali e nei processi di neurosviluppo, in cui è necessario un controllo rigoroso dell’azione degli ormoni tiroidei. Un’attività di DIO3 o un imprinting deregolati in questo locus sono stati associati ad alterazioni dell’omeostasi endocrina e sono stati studiati in contesti che includono anomalie dello sviluppo e biologia tumorale, dove la segnalazione degli ormoni tiroidei influisce sullo stato cellulare.
DIO3 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Dio3 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Dio3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Dio3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Dio3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.