DIO2 Plasmide Double Nickase (h): sc-402262-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DIO2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DIO2 Double Nickase Plasmid (h) e il DIO2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DIO2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DIO2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402262-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DIO2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402262-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **DIO2** codifica la deiodinasi di tipo II delle iodotironine (DIO2), un selenoenzima che catalizza la deiodinazione dell’anello esterno della tiroxina (T4) per generare l’ormone tiroideo attivo triiodotironina (T3). Controllando la disponibilità locale intracellulare di T3, DIO2 modella programmi trascrizionali dipendenti dal recettore degli ormoni tiroidei che influenzano il metabolismo energetico, la termogenesi e la differenziazione in modo specifico per tessuto e contesto. L’attività di DIO2 è integrata con vie che regolano la funzione mitocondriale, il metabolismo ossidativo e le risposte adattative a segnali ambientali, inclusi quelli legati a nutrienti e temperatura. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di DIO2 sono state associate a fenotipi metabolici e a disfunzioni correlate agli ormoni tiroidei, a sostegno della sua rilevanza per studi meccanicistici nella ricerca endocrina e metabolica.
DIO2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DIO2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DIO2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DIO2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DIO2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.