Dicer Plasmide Double Nickase (h): sc-400365-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Dicer Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Dicer Double Nickase Plasmid (h) e il Dicer Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DICER1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Dicer Antibody (F-10): sc-136979
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Dicer Plasmide Double Nickase (h) | sc-400365-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Dicer Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400365-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DICER1 codifica Dicer, un’endonucleasi RNasi III essenziale per la biogenesi di microRNA e siRNA, tramite la processazione delle forcine precursori in piccoli RNA di ~21–23 nt. Caricando questi piccoli RNA nei complessi RISC contenenti Argonaute, Dicer regola il silenziamento genico post-trascrizionale e influenza vie che controllano differenziamento, proliferazione e risposte allo stress. Le reti di piccoli RNA dipendenti da DICER1 contribuiscono alla stabilità del genoma e alla segnalazione immunitaria innata modulando l’attività degli elementi ripetitivi e le risposte alle rotture a doppio filamento. La disregolazione o le mutazioni di DICER1 alterano l’omeostasi dei microRNA e sono associate a programmi di espressione genica modificati in diversi contesti patologici, rendendolo un bersaglio chiave per studi meccanicistici sull’interferenza a RNA e sul controllo del trascrittoma.
Dicer Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DICER1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DICER1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DICER1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DICER1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.