DHS Plasmide Double Nickase (h): sc-402858-NIC

Il gene umano **DHPS** codifica la **deossipusina sintasi (DHS)**, un enzima essenziale NAD-dipendente che catalizza il primo passaggio dell’ipusinazione trasferendo un gruppo aminobutilico dalla spermidina a **eIF5A**, con formazione di **deossipusina**. Questa modifica post-traduzionale è necessaria per l’attività di eIF5A e sostiene l’elongazione della traduzione, il controllo della sintesi proteica e la progressione del ciclo cellulare, collegando il metabolismo delle poliammine alla proteostasi. La funzione di DHS interseca vie che regolano la crescita cellulare e le risposte allo stress, e l’alterazione dell’asse DHPS–eIF5A dell’ipusinazione è stata associata a proliferazione disregolata e a fenotipi neuroevolutivi. Poiché l’ipusinazione influenza la traduzione selettiva di motivi difficili da sintetizzare, DHPS viene spesso studiato nel contesto della riprogrammazione metabolica, dello stress proteotossico e dei meccanismi che mantengono l’omeostasi tissutale.

DHS Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DHPS nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DHPS. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DHPS. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DHPS interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.