DHFR Plasmide Double Nickase (h): sc-417022-NIC

La DHFR umana (diidrofolato reduttasi) catalizza la riduzione del diidrofolato a tetraidrofolato dipendente da NADPH, sostenendo il metabolismo dei composti a un carbonio necessario per la biosintesi de novo di purine e timidilato. Grazie al suo ruolo centrale nella produzione di nucleotidi, la DHFR supporta la replicazione e la riparazione del DNA, la progressione della fase S e la proliferazione, collegando il metabolismo dei folati al mantenimento del genoma. L’attività della DHFR è strettamente connessa alle risposte allo stress metabolico e alla sensibilità cellulare alla pressione esercitata dagli antifolati, rendendola un marcatore ampiamente utilizzato negli studi di adattamento metabolico e selezione. Un flusso deregolato della via dei folati e alterazioni dell’espressione della DHFR o del numero di copie sono stati associati a fenotipi proliferativi e a variabilità nella risposta ai farmaci in molteplici contesti patologici.

DHFR Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DHFR nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DHFR. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DHFR. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DHFR interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.