DHCR7 Plasmide Double Nickase (m): sc-419997-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DHCR7 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DHCR7 Double Nickase Plasmid (m) e il DHCR7 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Dhcr7. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DHCR7 Plasmide Double Nickase (m) | sc-419997-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DHCR7 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-419997-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Dhcr7 codifica la 7-deidrocolesterolo reduttasi (DHCR7), un enzima di membrana del reticolo endoplasmatico che catalizza la riduzione finale del 7-deidrocolesterolo a colesterolo nel ramo di Kandutsch–Russell della via di biosintesi del colesterolo. Controllando la disponibilità di colesterolo, DHCR7 influenza la composizione dei microdomini di membrana, la steroidogenesi e i processi di segnalazione dipendenti dai lipidi che plasmano la proliferazione e la differenziazione cellulari. L’alterazione dell’attività di DHCR7 perturba l’omeostasi degli steroli con accumulo di steroli precursori, modificando la sensibilità allo stress ossidativo e le reti di segnalazione dello sviluppo. Nei sistemi murini, Dhcr7 è ampiamente utilizzato per modellare come lo squilibrio della via del colesterolo influisca su fenotipi neuroevolutivi, metabolici e di traffico di membrana rilevanti per la biologia delle malattie genetiche legate agli steroli.
DHCR7 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Dhcr7 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Dhcr7. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Dhcr7. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Dhcr7 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.