Desmuslin Plasmide Double Nickase (m): sc-433269-NIC

Synm codifica la desmuslina, una proteina associata ai filamenti intermedi e arricchita a livello del disco Z, che contribuisce all’integrità del citoscheletro e alla meccanotrasduzione nel muscolo striato. Nel topo, la desmuslina interagisce con componenti del complesso distrofina–glicoproteine e con strutture di impalcatura sarcolemmale correlate per coordinare l’organizzazione delle miofibrille, la trasmissione della forza e il rimodellamento in risposta allo stress. Queste funzioni collegano Synm a vie che regolano l’architettura delle cellule muscolari, la segnalazione di adesione e il mantenimento della stabilità dell’apparato contrattile. La disregolazione delle reti di filamenti intermedi e delle proteine associate al disco Z è ampiamente rilevante nei modelli di cardiomiopatia e di degenerazione del muscolo scheletrico, rendendo Synm un bersaglio utile per analizzare i meccanismi di cedimento del citoscheletro.

Desmuslin Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Synm nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Synm. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Synm. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Synm interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.