Desmin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400248-ACT

Il gene umano **DES** codifica la desmina, una proteina dei filamenti intermedi di tipo III che forma una rete strutturale fondamentale nelle cellule muscolari scheletriche, cardiache e lisce. I filamenti di desmina integrano le miofibrille con il sarcolemma, i mitocondri e il nucleo, sostenendo la stabilità meccanica, la trasmissione della forza e il posizionamento degli organelli durante la contrazione e le risposte allo stress. Questa architettura citoscheletrica interagisce con l’organizzazione del sarcomero, la meccanotrasduzione e i pathway di proteostasi che mantengono l’integrità muscolare. Un’espressione deregolata di **DES** o difetti nell’assemblaggio dei filamenti sono associati a miopatie miofibrillari e cardiomiopatie, rendendo la desmina un bersaglio chiave per lo studio della degenerazione muscolare e del rimodellamento cellulare indotto dallo stress.

Desmin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DES senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Desmin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DES nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DES, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Desmin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DES nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Desmin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Desmin nelle cellule tumorali con espressione di DES silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.