DEPP Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-409806-ACT

C10orf10 codifica la decidual protein induced by progesterone (DEPP), un fattore responsivo allo stress che viene indotto in condizioni di ipossia e di limitata disponibilità di nutrienti ed è stato collegato alla regolazione dello stress ossidativo e di programmi associati all’autofagia. L’espressione di DEPP è stata associata a vie di adattamento cellulare che intersecano la segnalazione metabolica e l’omeostasi redox, inclusa la modulazione delle specie reattive dell’ossigeno e la sopravvivenza in condizioni di bassa disponibilità di ossigeno. Livelli alterati di DEPP sono stati riportati in diversi contesti che coinvolgono rimodellamento tissutale e infiammazione, e la sua disregolazione è stata esplorata in studi sulla biologia dei tumori e sui meccanismi delle malattie metaboliche. Queste caratteristiche rendono DEPP un bersaglio utile per analizzare il controllo trascrizionale dell’adattamento allo stress e fenotipi a valle come il flusso autofagico, la funzione mitocondriale e la vitalità cellulare.

DEPP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di C10orf10 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

DEPP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus C10orf10 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione C10orf10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DEPP. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus C10orf10 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DEPP nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DEPP nelle cellule tumorali con espressione di C10orf10 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.