DEK Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402862-LAC

DEK codifica una fosfoproteina conservata associata alla cromatina, che modula l’architettura della cromatina di ordine superiore, influenza la topologia dei nucleosomi e partecipa al controllo trascrizionale, al processamento dell’RNA e alla replicazione del DNA. Viene reclutata nei siti di danno al DNA e contribuisce alla stabilità del genoma attraverso effetti sulla scelta delle vie di riparazione, sulle risposte allo stress replicativo e sulla progressione del ciclo cellulare. Tramite queste attività, DEK si integra con le vie che regolano il rimodellamento della cromatina, la segnalazione del danno al DNA e i programmi trascrizionali infiammatori. Un’alterata espressione di DEK e una funzione della cromatina deregolata sono state associate a fenotipi di proliferazione e di adattamento allo stress, rilevanti per l’oncologia e per modelli di malattie immuno-mediate.

Le particelle di attivazione lentivirale DEK (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di DEK in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale DEK (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione DEK, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di DEK. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo DEK e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.