DDX15 Plasmide Double Nickase (h): sc-403959-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DDX15 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DDX15 Double Nickase Plasmid (h) e il DDX15 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DHX15. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DDX15 Antibody (E-6): sc-271686
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DDX15 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403959-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DDX15 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403959-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DHX15 (DDX15) codifica un’elicasi dell’RNA della famiglia DEAH-box che rimodella i complessi RNA–proteina durante lo splicing del pre-mRNA e in eventi più ampi di processamento dell’RNA. DDX15 agisce all’interno delle vie dello spliceosoma per supportare la rimozione degli introni, la sorveglianza dell’RNA e la maturazione di trascritti che regolano il controllo del ciclo cellulare e programmi di risposta allo stress. Influenzando la scelta dei siti di splicing e la fedeltà dei trascritti, DHX15 può modificare la composizione del proteoma e gli output di segnalazione in diversi contesti cellulari. La disregolazione dell’attività delle elicasi dell’RNA e delle reti di fattori di splicing che coinvolgono DHX15 è stata associata a stati di espressione genica alterati, rilevanti per fenotipi proliferativi e neuroevolutivi, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici del metabolismo dell’RNA.
DDX15 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DHX15 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DHX15. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DHX15. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DHX15 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.