Plasmide Double Nickase (h) DDX15: sc-403959-NIC

DHX15 (DDX15) code une hélicase à ARN de type DEAH qui remodèle les complexes ARN–protéines lors de l’épissage du pré-ARNm ainsi que dans des événements plus larges de maturation et de traitement de l’ARN. DDX15 agit au sein des voies du spliceosome pour favoriser l’élimination des introns, la surveillance des ARN et la maturation de transcrits qui régulent le contrôle du cycle cellulaire et les programmes de réponse au stress. En influençant le choix des sites d’épissage et la fidélité des transcrits, DHX15 peut modifier la composition du protéome et les sorties de signalisation dans divers contextes cellulaires. Une dérégulation de l’activité des hélicases à ARN et des réseaux de facteurs d’épissage impliquant DHX15 a été associée à des états d’expression génique altérés pertinents pour des phénotypes prolifératifs et neurodéveloppementaux, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques du métabolisme de l’ARN.

DDX15 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DHX15 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DHX15. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DHX15. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DHX15.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.