cytochrome b5 Plasmide Double Nickase (h): sc-405811-NIC

Il gene umano **CYB5A** codifica il citocromo b5, un’emoproteina ancorata alla membrana che trasferisce elettroni dalla NADH–citocromo b5 reduttasi a molteplici enzimi ossidativi nel reticolo endoplasmatico e nella membrana mitocondriale esterna. Sostiene vie metaboliche lipidiche fondamentali, tra cui la desaturazione e l’allungamento degli acidi grassi, la biosintesi del colesterolo e degli steroidi e l’ossidazione degli xenobiotici attraverso la modulazione dei cicli catalitici del citocromo P450. Influenzando l’equilibrio redox e il flusso metabolico, CYB5A contribuisce all’omeostasi cellulare negli epatociti e nei tessuti steroidogenici, dove il metabolismo ossidativo è elevato. L’alterazione del trasferimento di elettroni dipendente da CYB5A è stata associata a un metabolismo dei farmaci modificato e a difetti della steroidogenesi, rendendolo un nodo utile per lo studio della disregolazione metabolica e della segnalazione sensibile allo stato redox.

cytochrome b5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CYB5A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CYB5A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CYB5A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CYB5A interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.