CYP7A1 Plasmide Double Nickase (m): sc-419932-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CYP7A1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CYP7A1 Double Nickase Plasmid (m) e il CYP7A1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Cyp7a1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CYP7A1 Antibody (E-10): sc-518007
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CYP7A1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-419932-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CYP7A1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-419932-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Cyp7a1 codifica la colesterolo 7α-idrossilasi (CYP7A1), un enzima del citocromo P450 arricchito nel fegato che catalizza la tappa limitante la velocità nella via classica di sintesi degli acidi biliari a partire dal colesterolo. Controllando la conversione del colesterolo in acidi biliari primari, CYP7A1 regola la dimensione del pool di acidi biliari, l’omeostasi del colesterolo epatico e, a valle, il metabolismo dei lipidi e del glucosio attraverso reti di segnalazione responsiva agli acidi biliari. L’attività di Cyp7a1 si interseca con vie mediate da recettori nucleari, tra cui FXR e LXR, che coordinano la regolazione a feedback della biosintesi e del trasporto degli acidi biliari. Un’alterazione dell’espressione o della funzione di CYP7A1 è ampiamente utilizzata come punto di accesso meccanicistico per studiare fenotipi colestatici, dislipidemia e stress metabolico indotto dalla dieta in modelli murini.
CYP7A1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Cyp7a1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Cyp7a1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Cyp7a1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Cyp7a1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.