CYP26B1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403610-ACT

CYP26B1 codifica un enzima del citocromo P450 che catalizza il metabolismo ossidativo dell’acido retinoico tutto-trans (RA), contribuendo così a definire gradienti intracellulari di RA e a controllare l’intensità e la durata della segnalazione dei retinoidi. Regolando la disponibilità di RA, CYP26B1 influenza i programmi trascrizionali a valle di RAR/RXR che governano il patterning embrionale, lo sviluppo scheletrico e degli arti, la differenziazione epiteliale e la maturazione delle cellule immunitarie. Un’alterata attività di CYP26B1 può perturbare l’omeostasi del RA ed è stata collegata a disturbi dello sviluppo con fenotipi craniofacciali e scheletrici, con ulteriore rilevanza in contesti in cui la differenziazione guidata dal RA e la segnalazione infiammatoria risultano disregolate. In quanto nodo chiave del catabolismo dei retinoidi, CYP26B1 è spesso studiato in vie che collegano il metabolismo degli xenobiotici, la segnalazione dei morfogeni e la specificazione di linea cellulare.

CYP26B1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CYP26B1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CYP26B1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CYP26B1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CYP26B1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CYP26B1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CYP26B1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CYP26B1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CYP26B1 nelle cellule tumorali con espressione di CYP26B1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.