CUL-7 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404053-ACT

Il gene umano **CUL7** codifica la cullina-7 (CUL-7), una componente di impalcatura dei complessi **E3 ubiquitin-ligasi** di tipo Cullin-RING, che regolano il turnover proteico e la proteostasi. Attraverso la degradazione ubiquitina-dipendente di specifici substrati, CUL-7 influenza la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno del DNA e le vie di segnalazione che controllano la crescita e l’adattamento allo stress. La funzione di CUL-7 interseca la regolazione del citoscheletro e il controllo mitotico, collegando l’attività della ligasi dell’ubiquitina alla proliferazione cellulare e alla stabilità del genoma. Un’attività deregolata di CUL7 è stata associata ad alterazioni del controllo della crescita e alla biologia tumorale, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sulla segnalazione oncogenica e sulle dipendenze legate alla via dell’ubiquitina.

CUL-7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CUL7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CUL-7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CUL7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CUL7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CUL-7. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CUL7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CUL-7 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CUL-7 nelle cellule tumorali con espressione di CUL7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.