CRMP-4 Plasmide Double Nickase (h): sc-403305-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CRMP-4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CRMP-4 Double Nickase Plasmid (h) e il CRMP-4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DPYSL3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CRMP-4 Antibody (LL-5): sc-100323
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CRMP-4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403305-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CRMP-4 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403305-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DPYSL3 codifica la collapsin response mediator protein 4 (CRMP-4), una fosfoproteina citosolica che collega segnali di guida extracellulari al rimodellamento del citoscheletro nei neuroni e in altre cellule polarizzate. CRMP-4 partecipa alla segnalazione semaforina/neuropilina-plexina e a vie chinasiche a valle che regolano la dinamica dei microtubuli, l’estensione dei neuriti, il collasso del cono di crescita e la guida assonale. Al di fuori del sistema nervoso, DPYSL3 è stato implicato in programmi di migrazione e adesione cellulare tramite il coordinamento dell’organizzazione del citoscheletro. Alterazioni dell’espressione e degli stati di fosforilazione di DPYSL3/CRMP-4 sono state associate a meccanismi di neurosviluppo e neurodegenerazione e sono state studiate anche nell’invasività delle cellule tumorali e nei fenotipi metastatici come marcatore, dipendente dal contesto, della motilità cellulare.
CRMP-4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DPYSL3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DPYSL3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DPYSL3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DPYSL3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.