CRLR Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401631-ACT

CALCRL codifica per il recettore simile al recettore della calcitonina (CRLR), un GPCR di classe B che forma complessi recettoriali funzionali con le proteine RAMP per mediare la segnalazione di peptidi vasoattivi come CGRP e adrenomedullina. In seguito al legame con il ligando, CRLR attiva vie accoppiate alle proteine G, inclusa la cascata cAMP/PKA, e programmi trascrizionali a valle che regolano il tono vascolare, la funzione di barriera endoteliale, la biologia linfatica e le risposte infiammatorie. L’attività di CRLR si interseca con reti angiogeniche e di risposta allo stress, influenzando processi quali vasodilatazione, omeostasi dei fluidi e segnalazione neurovascolare. Un’alterata espressione o segnalazione di CALCRL è stata associata a fenotipi cardiovascolari e linfatici ed è stata studiata in contesti quali le vie neurovascolari legate all’emicrania, il rimodellamento vascolare polmonare e l’angiogenesi associata ai tumori.

CRLR Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CALCRL senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CRLR Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CALCRL nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CALCRL, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CRLR. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CALCRL nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CRLR nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CRLR nelle cellule tumorali con espressione di CALCRL silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.