CREM Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419799-ACT

Il CREM (cAMP responsive element modulator) murino è un fattore di trascrizione bZIP della famiglia CREB/ATF che si lega agli elementi di risposta al cAMP per regolare programmi di espressione genica dipendenti dallo stimolo. Integrando la segnalazione cAMP/PKA, input calcio-dipendenti ed eventi di fosforilazione associati alle MAPK, CREM influenza le dinamiche trascrizionali che modellano la plasticità neuronale, le risposte endocrine e gli stati di attivazione delle cellule immunitarie. La diversità delle isoforme di CREM, inclusi attivatori e repressori inducibili come ICER, consente un controllo specifico del contesto su reti geniche immediate-early e metaboliche. Un’attività di CREM deregolata è stata associata, in modelli sperimentali, ad alterazioni della fisiologia riproduttiva, della segnalazione responsiva allo stress e a patologie immunomediate, a supporto della sua utilità negli studi meccanicistici del controllo trascrizionale in vie rilevanti per la malattia.

CREM Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Crem senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CREM Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Crem nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Crem, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CREM. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Crem nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CREM nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CREM nelle cellule tumorali con espressione di Crem silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.