Cox-2 Plasmide Double Nickase (h): sc-400072-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Cox-2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Cox-2 Double Nickase Plasmid (h) e il Cox-2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PTGS2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Cox-2 Antibody (H-3): sc-376861
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Cox-2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400072-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cox-2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400072-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PTGS2 codifica la cicloossigenasi-2 (Cox-2), un enzima inducibile associato alle membrane che converte l’acido arachidonico in prostaglandina H2, precursore obbligato dei prostanoidi bioattivi. Cox-2 viene rapidamente sovraregolata da citochine infiammatorie, fattori di crescita e segnali di stress, integrando programmi trascrizionali legati a NF-κB, MAPK e AP-1 con la biosintesi dei mediatori lipidici. Attraverso la segnalazione a valle delle prostaglandine, modula il tono vascolare, le interazioni piastrine–endotelio, le risposte di dolore e febbre e il reclutamento delle cellule immunitarie. La disregolazione dell’espressione di PTGS2 e del flusso di prostanoidi è spesso studiata nell’infiammazione cronica, nei microambienti che favoriscono la crescita tumorale e in modelli di malattie metaboliche o cardiovascolari, in cui le vie degli eicosanoidi plasmano lo stato cellulare e il rimodellamento tissutale.
Cox-2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PTGS2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PTGS2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PTGS2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PTGS2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.