COL8A1 Plasmide Double Nickase (h): sc-405174-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- COL8A1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il COL8A1 Double Nickase Plasmid (h) e il COL8A1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira COL8A1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
COL8A1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405174-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
COL8A1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405174-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL8A1 codifica la catena alfa 1 del collagene di tipo VIII, un collagene a catena corta non fibrillare, arricchito in matrici extracellulari specializzate come l’endotelio corneale e le regioni associate alla membrana basale vascolare. COL8A1 contribuisce all’assemblaggio della matrice, all’adesione cellula–matrice e alla biomeccanica tissutale, influenzando il dialogo di segnalazione tra la matrice extracellulare e le vie intracellulari che regolano migrazione, proliferazione e differenziamento. Alterazioni dell’espressione di COL8A1 o della deposizione nella matrice sono state collegate a disfunzione endoteliale e a processi di rimodellamento rilevanti per la fisiologia oculare e la patologia vascolare, rendendolo un bersaglio utile per studiare l’omeostasi della matrice extracellulare e la meccanotrasduzione. Modelli in vitro e in vivo che perturbano COL8A1 aiutano a indagare i cambiamenti del comportamento cellulare guidati dalla matrice, le proprietà di barriera e le risposte allo stress.
COL8A1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus COL8A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di COL8A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di COL8A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con COL8A1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.