COL6A1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401069-NIC

COL6A1 codifica la catena alfa-1 del collagene di tipo VI, un componente chiave della matrice extracellulare (ECM) che si assembla in microfibrille “a collana di perle” e contribuisce a organizzare le reti di collagene e le matrici adiacenti alla membrana basale. Attraverso interazioni con integrine e altri recettori dell’ECM, COL6A1 partecipa all’adesione cellulare, alla meccanotrasduzione e alla regolazione dell’architettura tissutale, influenzando programmi di segnalazione quali i pathway delle adesioni focali e dell’interazione ECM–recettore. Alterazioni dell’espressione o della struttura di COL6A1 possono compromettere l’integrità della matrice e la comunicazione cellula–matrice, con implicazioni per l’omeostasi del tessuto connettivo e per la biologia neuromuscolare. Di conseguenza, COL6A1 è spesso studiato in modelli di rimodellamento della matrice di tipo fibrotico, di disfunzione dell’ECM associata a miopatie e di regolazione stromale dei fenotipi cellulari.

COL6A1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus COL6A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di COL6A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di COL6A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con COL6A1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.