CNT1 Plasmide Double Nickase (h): sc-404790-NIC

SLC28A1 codifica il trasportatore concentrativo di nucleosidi 1 (CNT1), un trasportatore ad alta affinità e dipendente dal sodio che media l’assorbimento cellulare di nucleosidi pirimidinici come uridina e citidina attraverso la membrana plasmatica. Controllando la via di recupero (salvage) dei nucleosidi, CNT1 influenza l’omeostasi dei pool di nucleotidi e sostiene la sintesi di DNA/RNA, collegando il trasporto di membrana a replicazione, riparazione e progressione del ciclo cellulare. L’attività di CNT1 si intreccia con programmi metabolici più ampi che bilanciano la biosintesi de novo dei nucleotidi rispetto al salvage, e una sua espressione alterata è stata associata a cambiamenti nella differenziazione epiteliale e nella capacità proliferativa in diversi contesti tissutali. Di conseguenza, SLC28A1 è spesso studiato nella biologia del trasporto dei nucleosidi, nelle risposte allo stress metabolico e nei meccanismi che modulano la sensibilità alla disponibilità di nucleosidi in modelli rilevanti per la malattia.

CNT1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SLC28A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SLC28A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SLC28A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SLC28A1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.