CKR-3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404160-ACT

CCR3 (CKR-3) codifica un recettore per chemochine appartenente alla superfamiglia dei GPCR che si lega preferenzialmente alle eotassine (CCL11, CCL24, CCL26) e ad altre chemochine CC per dirigere la chemiotassi dei leucociti. La segnalazione di CCR3 attiva vie dipendenti da Gαi che regolano i flussi di calcio, le cascate PI3K/AKT e MAPK, l’attivazione delle integrine e il rimodellamento del citoscheletro, coordinando la migrazione e il reclutamento nei tessuti. Nell’immunobiologia umana, CCR3 è fortemente associato al traffico di eosinofili e basofili e contribuisce ai circuiti infiammatori a livello delle barriere mucosali. Un’attività disregolata di CCR3 è spesso oggetto di studio nell’infiammazione allergica, nell’asma e nelle patologie tissutali guidate dagli eosinofili, nonché nei modelli di migrazione cellulare mediata da recettori.

CKR-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CCR3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CKR-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CCR3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CCR3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CKR-3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CCR3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CKR-3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CKR-3 nelle cellule tumorali con espressione di CCR3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.