Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CIN85 Plasmide Double Nickase (h): sc-402573-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CIN85 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CIN85 Double Nickase Plasmid (h) e il CIN85 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SH3KBP1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CIN85 Antibody (A-7): sc-166862
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CIN85 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402573-NIC | 20 µg | $410.00 |
SH3KBP1 codifica per CIN85, una proteina scaffold multi-adattatrice che coordina il traffico endocitico e l’attenuazione del segnale assemblando complessi a valle delle tirosin-chinasi recettoriali, incluso EGFR, tramite interazioni con le ligasi di ubiquitina Cbl e con i componenti della macchina endocitica. Attraverso i suoi domini SH3 e le interfacce di legame con regioni ricche di prolina, CIN85 regola l’internalizzazione dei recettori, l’ubiquitinazione e lo smistamento lisosomiale, modulando ampiezza e durata della segnalazione MAPK e PI3K-AKT. CIN85 contribuisce anche al rimodellamento del citoscheletro, alla formazione di invadopodi e alla dinamica delle vescicole, processi associati alla migrazione cellulare e a fenotipi invasivi in diversi contesti patologici. Vie associate a CIN85 deregolate sono state studiate in relazione alla segnalazione oncogenica, al turnover dei recettori immunitari e ad alterazioni del traffico di membrana.
CIN85 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SH3KBP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SH3KBP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SH3KBP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SH3KBP1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.