Partículas Lentivirales de Activación (h) ChREBP: sc-401803-LAC

MLXIPL codifica la proteína de unión a elementos de respuesta a carbohidratos (ChREBP), un factor de transcripción sensor de glucosa que acopla el flujo intracelular de carbohidratos con programas génicos que controlan la glucólisis, la lipogénesis de novo y la síntesis de triglicéridos. En respuesta a metabolitos de los carbohidratos, ChREBP se transloca al núcleo y se une a elementos de respuesta a carbohidratos para regular enzimas metabólicas y transportadores, integrando el estado nutricional con las vías de almacenamiento energético hepático y del tejido adiposo. Este eje regulador se entrecruza con la señalización de la insulina, la modulación por la proteína quinasa activada por AMP (AMPK) y redes transcripcionales más amplias que gobiernan la homeostasis lipídica. La actividad desregulada de ChREBP se ha asociado con fenotipos metabólicos relevantes para la esteatosis hepática, la resistencia a la insulina y el riesgo cardiometabólico, lo que convierte a MLXIPL en un nodo útil para estudios mecanísticos de la regulación génica impulsada por nutrientes.

Las partículas de activación lentiviral ChREBP (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de MLXIPL en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral ChREBP (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción MLXIPL, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de ChREBP. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo MLXIPL y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.