CEP192 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406971-ACT

CEP192 (proteina centrosomiale 192) è un’impalcatura conservata del materiale pericentriolare che organizza la maturazione del centrosoma reclutando regolatori chiave della nucleazione dei microtubuli, inclusi componenti del complesso ad anello della γ-tubulina e chinasi quali PLK1 e AURKA. Coordinando la duplicazione dei centrioli, l’assemblaggio del fuso e la corretta segregazione dei cromosomi, CEP192 sostiene una progressione ordinata del ciclo cellulare durante la mitosi. L’alterazione o la disregolazione dell’architettura del centrosoma e la sua amplificazione, collegate a vie dipendenti da CEP192, sono frequentemente associate a instabilità cromosomica, aneuploidia e capacità proliferativa alterata nella biologia dei tumori. CEP192 umano rappresenta quindi un nodo utile per studiare la segnalazione guidata dal centrosoma, la dinamica del checkpoint mitotico e l’organizzazione dei microtubuli nelle cellule in proliferazione.

CEP192 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CEP192 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CEP192 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CEP192 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CEP192, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CEP192. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CEP192 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CEP192 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CEP192 nelle cellule tumorali con espressione di CEP192 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.