CDYL CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406624-ACT

ヒトCDYL（chromodomain Y-like）は、クロマチンに結合するコレギュレーターであり、ヒストン上のメチル化リジンに結合して転写のエピジェネティック制御に寄与します。CDYLはクロモドメインとクロトニルCoAヒドラターゼ様活性を介して、ヒストンのクロトニル化およびアセチル化状態に影響を与え、ヘテロクロマチン形成、転写抑制、ならびに発生過程の遺伝子プログラムを支えます。さらにCDYLは、神経分化、生殖細胞の発生、DNA損傷に連動したクロマチンリモデリングを制御する経路にも関与しており、ゲノムの調節状態を維持する役割を反映しています。CDYLの発現や機能の異常は、神経発達表現型やがんに関連するエピジェネティックな再プログラミングで報告されている転写ネットワークの変化と関連づけられており、クロマチン依存的な遺伝子制御機構の解明に向けた研究対象として重要です。

CDYL CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CDYLの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CDYL CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CDYL 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCDYL転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CDYLの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCDYL遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCDYL依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCDYL発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCDYL経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。