CDK5RAP1 Plasmide Double Nickase (h): sc-407278-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CDK5RAP1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CDK5RAP1 Double Nickase Plasmid (h) e il CDK5RAP1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CDK5RAP1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CDK5RAP1 Antibody (D-1): sc-398764
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CDK5RAP1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-407278-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CDK5RAP1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-407278-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDK5RAP1 (proteina 1 associata alla subunità regolatoria di CDK5) è un enzima mitocondriale implicato nella regolazione post-trascrizionale tramite la modifica dei tRNA, favorendo un’efficiente traduzione mitocondriale e la fosforilazione ossidativa. Modulando l’integrità della sintesi proteica mitocondriale, CDK5RAP1 influenza la bioenergetica cellulare, l’equilibrio redox e le vie di adattamento allo stress. L’alterazione della funzione di CDK5RAP1 è stata collegata a cambiamenti dell’omeostasi mitocondriale ed è oggetto di studio in contesti in cui il rimodellamento metabolico e la disfunzione mitocondriale contribuiscono alla biologia delle malattie, inclusi cancro e neurodegenerazione. In quanto regolatore associato ai mitocondri, CDK5RAP1 rappresenta un nodo accessibile per analizzare come l’espressione genica mitocondriale influenzi lo stato cellulare e la sopravvivenza in condizioni di stress.
CDK5RAP1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CDK5RAP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CDK5RAP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CDK5RAP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CDK5RAP1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.