Cdk2 Plasmide Double Nickase (h): sc-400111-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Cdk2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Cdk2 Double Nickase Plasmid (h) e il Cdk2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CDK2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Cdk2 Antibody (D-12): sc-6248
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Cdk2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400111-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cdk2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400111-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDK2 codifica la chinasi ciclina‑dipendente 2 (Cdk2), una chinasi serina/treonina che si associa alle cicline E e A per coordinare la transizione G1/S e la progressione della fase S. Cdk2 integra i segnali mitogenici con l’attivazione delle origini di replicazione, la duplicazione dei centrosomi e il controllo dei checkpoint del ciclo cellulare tramite la fosforilazione di substrati dell’asse RB–E2F e dei componenti della macchina di replicazione del DNA. La sua attività è regolata da inibitori delle CDK come p21 e p27 e dalla fosforilazione attivante, collegando CDK2 alle risposte al danno al DNA e allo stress replicativo. Una segnalazione di CDK2 deregolata è frequentemente associata a fenotipi proliferativi e ad alterazioni della manutenzione del genoma osservate nella biologia del cancro e in sistemi modello correlati.
Cdk2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CDK2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CDK2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CDK2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CDK2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.