CD89 Plasmide Double Nickase (h): sc-403014-NIC

FCAR codifica CD89 (FcαRI), un recettore immunoglobulinico della linea mieloide che lega IgA e si associa alla catena γ dei FcR per trasdurre segnali attivatori o inibitori a seconda della configurazione del recettore. L’ingaggio di CD89 regola fagocitosi, citotossicità cellulare dipendente da anticorpi, burst ossidativo, rilascio di citochine ed espressione di geni infiammatori attraverso vie di segnalazione mediate da ITAM che coinvolgono chinasi della famiglia Src, SYK, PI3K e le cascate a valle di NF-κB e MAPK. Questo recettore è espresso in modo prominente su neutrofili, monociti, macrofagi, eosinofili e su alcuni sottotipi di cellule dendritiche, modellando le risposte immunitarie mucosali e sistemiche verso microbi opsonizzati e immunocomplessi. Una segnalazione IgA–CD89 deregolata e un’alterata espressione di FCAR sono state implicate nell’infiammazione guidata da immunocomplessi e nella disfunzione delle cellule mieloidi, rilevanti per la biologia delle malattie infiammatorie e autoimmuni.

CD89 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FCAR nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FCAR. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FCAR. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FCAR interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.