CD44 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400209-LAC

Il CD44 umano codifica una glicoproteina transmembrana ampiamente espressa che funge da recettore principale per l’acido ialuronico e per altri ligandi della matrice extracellulare, coordinando le interazioni cellula–cellula e cellula–matrice. Attraverso una segnalazione dipendente dalle diverse isoforme e l’accoppiamento con il citoscheletro, CD44 influenza adesione, migrazione, homing linfocitario e dinamiche epitelio–mesenchimali, integrando segnali provenienti dalla matrice extracellulare con vie intracellulari come il rimodellamento mediato dalle GTPasi Rho e il crosstalk con i recettori tirosin-chinasici. L’attività di CD44 è spesso collegata a risposte infiammatorie e al rimodellamento tissutale, e alterazioni dell’espressione o dei pattern di splicing sono state associate all’invasione tumorale, a fenotipi legati alla metastasi e a proprietà di cellule staminali “tumor-like”. Queste caratteristiche rendono CD44 un nodo utile per studiare la segnalazione del microambiente, il traffico dei leucociti e la regolazione dell’espressione genica guidata dalla matrice extracellulare.

Le particelle di attivazione lentivirale CD44 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CD44 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CD44 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CD44, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CD44. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CD44 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.