CD42c Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403712-ACT

GP1BB codifica per la glicoproteina Ib beta (CD42c), una subunità essenziale del complesso recettoriale piastrinico GPIb-IX-V, che media l’adesione delle piastrine al fattore di von Willebrand in condizioni di elevato shear (sforzo di taglio). Attraverso una segnalazione coordinata con gli altri componenti del complesso, CD42c supporta l’ancoraggio iniziale delle piastrine, la loro attivazione e i riarrangiamenti del citoscheletro che influenzano la formazione del trombo e le risposte emostatiche. L’alterazione o la deregolazione dell’espressione di GP1BB compromette l’assemblaggio e la funzione del recettore sulla superficie piastrinica, collegando questa via a difetti ereditari dell’adesione piastrinica e a fenotipi emorragici anomali. Di conseguenza, la regolazione di GP1BB è spesso studiata in modelli di megacariopoiesi, biogenesi piastrinica e segnalazione piastrinica dipendente dallo shear.

CD42c Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GP1BB senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD42c Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GP1BB nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GP1BB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD42c. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GP1BB nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD42c nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD42c nelle cellule tumorali con espressione di GP1BB silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.