Plasmide Double Nickase (h) CD39: sc-402644-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CD39 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CD39 Double Nickase (h) et le plasmide CD39 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ENTPD1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CD39 Antibody (BU61): sc-65262
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CD39 | sc-402644-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CD39 | sc-402644-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’ENTPD1 humain code CD39 (ectonucléoside triphosphate diphosphohydrolase 1), une ectoenzyme de surface cellulaire qui hydrolyse l’ATP et l’ADP extracellulaires en AMP, modulant ainsi la signalisation purinergique et les signaux inflammatoires induits par les nucléotides. En contrôlant la disponibilité des substrats pour la production d’adénosine médiée par CD73, CD39 contribue à réguler l’activation des leucocytes, l’homéostasie endothéliale, la réactivité plaquettaire et la protection tissulaire en situation de stress. L’activité d’ENTPD1 s’articule avec la signalisation des récepteurs P2, les programmes associés à l’hypoxie et des voies immunométaboliques qui influencent la libération de cytokines et la fonction de barrière. Une expression ou une activité dérégulée de CD39 a été associée, dans des systèmes expérimentaux, à l’échappement immunitaire tumoral, à l’inflammation chronique, à la dysfonction vasculaire et à des phénotypes liés à la thrombose.
CD39 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ENTPD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ENTPD1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ENTPD1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ENTPD1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.