CD39 Plasmide Double Nickase (h): sc-402644-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD39 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CD39 Double Nickase Plasmid (h) e il CD39 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ENTPD1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD39 Antibody (BU61): sc-65262
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD39 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402644-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD39 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402644-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’ENTPD1 umano codifica CD39 (ectonucleoside trifosfato difosfoidrolasi 1), un ectoenzima di superficie cellulare che idrolizza l’ATP e l’ADP extracellulari in AMP, modulando così la segnalazione purinergica e gli stimoli infiammatori guidati dai nucleotidi. Controllando la disponibilità di substrato per la produzione di adenosina mediata da CD73, CD39 contribuisce a regolare l’attivazione dei leucociti, l’omeostasi endoteliale, la reattività piastrinica e la protezione tissutale durante lo stress. L’attività di ENTPD1 si interseca con la segnalazione dei recettori P2, con programmi associati all’ipossia e con vie immunometaboliche che influenzano il rilascio di citochine e la funzione di barriera. Un’espressione o attività dis-regolata di CD39 è stata collegata, in sistemi sperimentali, all’elusione immunitaria tumorale, all’infiammazione cronica, alla disfunzione vascolare e a fenotipi legati alla trombosi.
CD39 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ENTPD1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ENTPD1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ENTPD1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ENTPD1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.