CD37 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-419547-LAC

Cd37 codifica CD37, una glicoproteina di superficie della famiglia delle tetraspanine, altamente espressa nelle cellule B e in altri sottotipi di leucociti, dove organizza microdomini di membrana che coordinano la segnalazione recettoriale. CD37 modula il recettore delle cellule B e le vie co-stimolatorie, influenzando l’attività delle chinasi della famiglia Src, la segnalazione PI3K/AKT, i flussi di calcio e i programmi trascrizionali a valle che determinano attivazione, proliferazione e sopravvivenza. Grazie al suo ruolo nel traffico e nel clustering dei recettori immunitari e delle molecole di adesione, CD37 contribuisce alla presentazione dell’antigene, alla migrazione cellulare e alla formazione della sinapsi immunologica. Alterazioni dell’espressione o della funzione di CD37 sono state associate a disregolazione immunitaria e alla biologia di malattie ematologiche legate alle cellule B, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici delle reti di segnalazione linfocitaria.

Le particelle di attivazione lentivirale CD37 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Cd37 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CD37 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Cd37, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CD37. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Cd37 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.