CD3-ε Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400240-LAC

CD3E codifica CD3-ε, una subunità essenziale del complesso TCR-CD3 del recettore delle cellule T (TCR), che supporta lo sviluppo dei linfociti T, l’assemblaggio del TCR dipendente dall’antigene e la trasduzione del segnale a livello della membrana plasmatica. Attraverso la segnalazione mediata dal motivo di attivazione basato su tirosina degli immunorecettori (ITAM) nelle catene CD3 associate, CD3-ε contribuisce ad avviare cascate chinasi che coinvolgono LCK e ZAP70, portando all’attivazione a valle delle vie MAPK, NF-κB e NFAT, che regolano la produzione di citochine e la differenziazione delle cellule T. Alterazioni dell’espressione o della funzione di CD3E sono associate a difetti nella selezione dei timociti e a risposte immunitarie adattative compromesse, e il gene è spesso studiato in contesti di immunodeficienza, disregolazione immunitaria e immunologia dei tumori.

Le particelle di attivazione lentivirale CD3-ε (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CD3E in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CD3-ε (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CD3E, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CD3-ε. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CD3E e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.