Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD274/PD-L1: sc-401140-ACT

CD274 code le ligand de point de contrôle immunitaire PD‑L1, une glycoprotéine de surface cellulaire qui se lie à PD‑1 (PDCD1) sur les lymphocytes T activés afin d’atténuer la signalisation du TCR, la production de cytokines et la fonction cytotoxique. L’expression de PD‑L1 est régulée par des signaux inflammatoires et oncogéniques, notamment la voie IFN‑γ–JAK/STAT ainsi que des voies telles que PI3K/AKT et NF‑κB, façonnant la résistance immunitaire adaptative dans les microenvironnements tissulaires. Une dérégulation de CD274/PD‑L1 contribue à l’échappement immunitaire dans de nombreux cancers et est également impliquée dans les infections chroniques et la régulation immunitaire associée aux maladies auto-immunes via la modulation de la présentation de l’antigène et des programmes d’épuisement des lymphocytes T. En tant que nœud mesurable de la signalisation immunitaire, PD‑L1 est fréquemment étudiée dans des systèmes de co‑culture tumeur–immunité, des essais de réponse à l’interféron et des analyses de voies visant à disséquer la régulation des points de contrôle.

CD274/PD-L1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD274 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD274/PD-L1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD274 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD274, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD274/PD-L1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD274 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD274/PD-L1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD274/PD-L1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CD274 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.