CD229 Plasmide Double Nickase (h): sc-404895-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD229 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CD229 Double Nickase Plasmid (h) e il CD229 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira LY9. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD229 Antibody (HLy 9.1.25): sc-58992
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD229 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404895-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD229 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404895-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LY9 codifica CD229 (SLAMF3), un recettore immunoregolatore della famiglia SLAM espresso prevalentemente sui linfociti, dove media interazioni omofiliche che modulano le soglie di attivazione, la produzione di citochine e la comunicazione intercellulare. Attraverso l’associazione con proteine adattatrici come SAP/SH2D1A e la segnalazione a valle mediata da chinasi della famiglia Src, CD229 contribuisce alla modulazione delle risposte delle cellule T e B e influenza l’organizzazione della sinapsi immunologica. Un’alterazione della segnalazione LY9/CD229 è stata implicata nella disregolazione immunitaria, con associazioni riportate a fenotipi autoimmuni e alla biologia delle neoplasie linfoidi. In quanto recettore di superficie con effetti attivanti e inibitori dipendenti dal contesto, CD229 è spesso studiato nelle vie che governano la differenziazione dei linfociti, l’esaurimento e la co-segnalazione del recettore dell’antigene.
CD229 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LY9 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LY9. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LY9. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LY9 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.