CD19 Plasmide Double Nickase (h): sc-400719-NIC

CD19 è una glicoproteina transmembrana con espressione ristretta alle cellule B che funge da corecettore, amplificando la segnalazione del recettore delle cellule B (BCR) organizzando complessi di segnalazione con CD21 e CD81. Attraverso la modulazione delle vie PI3K–AKT, MAPK/ERK e dei circuiti calcio-dipendenti, CD19 contribuisce a definire le soglie di attivazione che regolano la proliferazione, la differenziazione e le risposte anticorpali delle cellule B. L’espressione di CD19 è strettamente legata all’impegno di linea delle cellule B e alla dinamica dei centri germinativi, e la sua disregolazione è spesso impiegata come caratteristica molecolare negli studi sulle neoplasie delle cellule B e sulla patologia immunomediata. In quanto marcatore di superficie con ruoli di segnalazione ben definiti, CD19 rappresenta un punto d’ingresso maneggevole per analizzare le reti di segnalazione delle cellule B e la selezione guidata dall’antigene.

CD19 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CD19 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CD19. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CD19. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CD19 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.