CD154 Plasmide Double Nickase (h): sc-401682-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD154 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CD154 Double Nickase Plasmid (h) e il CD154 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CD40LG. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD154 Antibody (F-1): sc-374635
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD154 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401682-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD154 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401682-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD40LG codifica CD154 (ligando di CD40), una proteina di membrana di tipo II espressa transitoriamente sui linfociti T CD4+ attivati, che interagisce con CD40 su cellule B, cellule dendritiche e macrofagi per coordinare il dialogo tra immunità adattativa e innata. La segnalazione CD154–CD40 promuove l’attivazione delle cellule B, la formazione dei centri germinativi, la ricombinazione di switch di classe delle immunoglobuline e la “licenza” delle cellule dendritiche attraverso programmi trascrizionali guidati da NF-κB e MAPK. Questo asse modula anche la produzione di citochine e la segnalazione costimolatoria nelle risposte dei linfociti T follicolari helper e nelle vie di presentazione dell’antigene. Un’attività o un’espressione deregolata di CD40LG è associata a fenotipi di immunodeficienza e di iperattivazione immunitaria, rendendolo rilevante per studi meccanicistici dell’immunità umorale, dell’infiammazione e della regolazione del microambiente linfoide.
CD154 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CD40LG nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CD40LG. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CD40LG. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CD40LG interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.