CD133 Plasmide Double Nickase (m): sc-437381-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD133 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CD133 Double Nickase Plasmid (m) e il CD133 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Prom1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD133 Antibody (E-11): sc-365537
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD133 Plasmide Double Nickase (m) | sc-437381-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD133 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-437381-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Prom1 codifica la glicoproteina di membrana pentaspan CD133, una proteina legante il colesterolo arricchita nelle protrusioni della membrana plasmatica, che contribuisce a organizzare i microdomini di membrana e a regolare la polarità cellulare. Nei tessuti murini, CD133 è ampiamente utilizzata come marcatore dei compartimenti di cellule staminali e progenitrici ed è associata a programmi che controllano autorinnovamento, differenziamento e rigenerazione tissutale. La segnalazione associata a CD133 interseca vie coinvolte nell’organizzazione epiteliale e nella dinamica del citoscheletro, e un’alterata espressione di Prom1 è stata riportata in modelli di degenerazione retinica, difetti del neurosviluppo e fenotipi di cellule iniziatrici di tumore. Gli studi funzionali su Prom1 chiariscono quindi i meccanismi di impegno di linea, degli epiteli con funzione di barriera e di stati cellulari di tipo staminale rilevanti per la biologia delle malattie.
CD133 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Prom1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Prom1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Prom1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Prom1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.