CD133 Plasmide Double Nickase (h): sc-418263-NIC

PROM1 codifica CD133 (prominina-1), una glicoproteina transmembrana a cinque passaggi arricchita nelle protrusioni della membrana plasmatica e nei microvilli, che contribuisce all’organizzazione della membrana e alla polarità cellulare. Nei tessuti umani, CD133 identifica compartimenti simili a cellule staminali e progenitrici ed è spesso utilizzato per studiare l’eterogeneità degli stati cellulari, i programmi di autorinnovamento e le traiettorie di differenziamento. La biologia associata a PROM1 interseca programmi di segnalazione e trascrizionali legati all’attività di Wnt/β-catenina, Notch e PI3K–AKT, nonché processi che regolano l’architettura epiteliale e la dinamica delle vescicole. Un’alterazione dell’espressione di CD133 è stata riportata in molteplici neoplasie e in contesti di rimodellamento tissutale, a supporto della sua rilevanza nello studio dell’inizio tumorale, dell’invasione e delle sottopopolazioni resistenti alle terapie, senza implicare un’utilità clinica.

CD133 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PROM1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PROM1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PROM1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PROM1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.