CCK Plasmide Double Nickase (h): sc-401337-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CCK Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CCK Double Nickase Plasmid (h) e il CCK Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CCK. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CCK Plasmide Double Nickase (h) | sc-401337-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CCK Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401337-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CCK codifica la colecistochinina, un ormone peptidico e neuropeptide che viene processato a partire da un prepropeptide in molteplici forme bioattive, le quali segnalano principalmente attraverso CCK1R e CCK2R. Nel tratto gastrointestinale, CCK regola la secrezione di enzimi pancreatici, la contrazione della colecisti e i segnali di sazietà, mentre nel sistema nervoso centrale modula la neurotrasmissione e le risposte neuroendocrine. La segnalazione mediata da GPCR indotta da CCK coinvolge la fosfolipasi C, la mobilizzazione del Ca²⁺ intracellulare e le vie MAPK, coordinando programmi di secrezione ed eccitabilità neuronale. Una segnalazione CCK deregolata è stata associata ad alterazioni dell’omeostasi metabolica e a fenotipi neuropsichiatrici, a supporto di studi meccanicistici sul processamento del peptide, sull’accoppiamento recettoriale e sulla dinamica della segnalazione a valle.
CCK Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CCK nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CCK. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CCK. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CCK interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.